العينه وتقدير السكر

العينة Specimen


يفضل استخدام المصل في معظم الاختبارات ويفضل دائما إجراء الاختبار بعد فصل المصل Serum ، وإذا تأخر أجراء التحليل يحفظ المصل في الثلاجة . وبصفة عامة يفضل إجراء الاختبارات علي عينة صيام .
المحلول القياسي ( المعياري) Standard Solution
هو محلول يتم تحضيره بتركيز معروف من المادة المراد تقديرها ويعامل في الاختبار مثل العينة – مثلا المحلول القياسي للجلوكوز هو محلول مائي علي تركيز معروف من الجلوكوز النقي الجاف .
كيفية استخدام أجهزة القياس الضوئي للحصول علي النتائج.
تشتمل هذه الأجهزة علي نوعين من القياسات .


الامتصاص ِA) )ِAbsorbance


النفاذية Transmittance(T)


الخطوات


- يضبط الطول الموجي المناسب لقراءة الاختبار
- يضبط صفر الامتصاص (A) بالمحلول الخالي ( البلانك Blank )
- تقرا أنبوبة العينة ( الاختبار T)

حيث أن :
A الامتصاص
T قراءة الاختبار
S قراءة المحلول القياسي
Cs تركيز المحلول القياسي
Mg/DI قيمة المركب مقدرة بالميلجرام في كل 100 مل من الدم ( ديسيليتر )
استخدام العبوات الجاهزة Kits
تستخدم معظم المعامل حاليا عبوات جاهزة ( أطقم) (Kits) تنتجها العديد من الشركات المتخصصة تحتوي علي جميع المحاليل والكواشف اللازمة لأجراء الاختبار .
وسنتناول فكرة ( أساس) الطرق الشائعة للاختبارات دون التطرف لتفاصيل خطوات الاختبار والتي تختلف تبعا للطريقة التي تقوم الشركة باستخدامها وسنذكر كمثال خطوات تقدير الجلوكوز في الدم ( راجع تقدير الجلوكوز )
الاحتياطات الواجب مراعاتها لضمان سلامة استخدام أطقم الاختبارات Kits
1. حفظ الأطقم في درجة الحرارة المناسبة والمبينة علي العبوة من الخارج.
2. عدم استخدام المحاليل والكواشف بعد انتهاء فترة صلاحيتها طبقا للتاريخ المدون علي العبوة وعلي زجاجات الكواشف.
3. دراسة النشرة جيدا وإتباع آلاتي بكل دقة .
- الخطوات المدونة لأجراء الاختبار .
- استخدام الطول الموجي المطلوب .
- محلول البلانك الواجب استخدامه .
- فترة ودرجة حرارة التحصين إن وجد.
- طريقة حساب النتائج
- المعدل المرجعي ( المعدل الطبيعي) المدون بالنشرة .
- أي ملاحظات خاصة أخري .
ملاحظات :


• بعض الأطقم تحتوي علي محاليل مركزة ينبغي تخفيفها بالنسبة المطلوبة وبعضها قد يحتوي علي الكاشف علي هيئة بودرة تذاب في الحجم المدون بالنشرة ، ويراعي فترة الصلاحية بعد التحضير وتكتب علي الزجاجات التي تم تحضيرها بطريقة واضحة وتحفظ في درجة الحرارة المناسبة .
• تقوم الشركات بترقيم الكواشف لسهولة تداولها أثناء العمل
وتكتب كآلاتي ...... R2- R3– ( R ).R1-اختصار Reagent . ويراعي عند إجراء الاختبار ومنع الكواشف طبقا للترتيب الموجود في الجدول.
الاحتياجات التي ينبغي مراعاتها عند استخدام أجهزة القياس الضوئي :


- ضرورة استخدام محلول البلانك لضبط صفر الامتصاص والذي يلغي تداخل الامتصاص الذي يمكن أن ينتج من الكواشف ويجب استخدام وتحضير البلانك بالطريقة المدونة بالنشرة ، والمحلول الخالي ( البلانك) هو محلول يحتوي علي الكواشف التي تستخدم في الاختبار ولا يحتوي علي المركب الذي نقوم بتقديره .
- إستعمال كوفيت Cuvettes نظيفة وجافة مع مراعاة تنظيفها من الخارج قبل وضعها في الجهاز .
- تجنب وجود فقاعات هواء في الكوفيت مع وضع الحد الأدنى من المحلول والذي يختلف تبعا لنوع الكوفيت .
- التأكد من وضع سطح الكوفيت المحدد لمرور الضوء مواجها للمصدر الضوئي .
- غلق المكان ووضع الكوفيت قبل القراءة حيث أن ضوء الشمس والمصابيح الكهربائية يؤثر علي القراءة .
مرسبات البروتينات من الدم :


تتطلب بعض الطرق تقدير المركبات الكيميائية في الدم أو المصل أو البلازما ترسيب البروتينات للحصول علي سائل رائق لأجراء الاختبار وهي :
- حمض تنجستيك Tungestic Acid
الطريقة الشائعة لاستخدامه هي إضافة كميات متساوية من تنجستات الصوديوم بتركيز 10% وحمض كبريتك 2/3 عياري( حوالي 18.6 مل في الليتر ) – ينتج حمض تنجستيك من تفاعل المحلولين – وبعض الأطقم يوجد بها حمض تنجستك جاهزا .
- حمض ثلاثي كلوريد الخليك بتركيز 10% أو 20% .
تقدير الجلوكوز في الدم


الجلوكوز هو المصدر الرئيسي للطاقة ، يتحول جزء من الجلوكوز الذي يمتص بعد تناول وجبة بها مواد كربوهيدراتية إلي جليكوجين – يتحول جليكوجين الكبد إلي جلوكوز أثناء الصيام لفترة قصيرة وبذلك يحافظ علي معدل الجلوكوز في الدم .
- العينة : بلازما أو مصل
عند استخدام البلازما يفضل أن تؤخذ عينة الدم علي مانع للتجلط من أوكسالات البوتاسيوم وفلوريد الصوديوم – يحضر نسبة 3 أجزاء أوكسالات بوتاسيوم وجزء واحد فلوريد صوديوم .مثلا لتحضير 100 جرام يخلط :
75 جرام أوكسالات بوتاسيوم
25 جرام فلوريد صوديوم
فلوريد الصوديوم يمنع استهلاك الجلوكوز بواسطة خلايا الدم . ويمكن استخدام أوكسالات البوتاسيوم أو الادتا كمانع للتجلط.
- يراعي ضرورة فصل البلازما بعد اخذ العينة مباشرة ، وفصل المصل بمجرد تكون الجلطة .
- ترك الدم في درجة حرارة الغرفة بدون فصل البلازما أو المصل يؤدي إلي نقص كمية الجلوكوز في العينة نتيجة استهلاكه بواسطة خلايا الدم ، وتقدر كمية النقص بحوالي 5 – 10 مجم/ ديسليتر كل ساعة .
- إذا لم يتم إجراء الاختبار بعد فصل البلازما أو المصل يحفظ في الثلاجة .
إجراء تقدير الجلوكوز بطريقة جلوكوز أكسيديز (GOD Glucose Oxidase)
تحتوي الأطقم علي الكاشف والمحلول القياسي ، بعضها يحتوي علي الكاشف كمحلول جاهز للاستخدام وبعضها يوجد به الكاشف علي هيئة مسحوق يذاب في حجم الماء المقطر الذي تحدده الشركة المنتجة بالنشرة المرفقة – في هذه الحالة يراعي كتابة تاريخ التحضير وفترة الصلاحية علي الزجاجات التي يتم تحضيرها .
الخطوات :


ترقم 3 أنابيب اختبار B-S-T وتوضع في حامل أنابيب معدني :


B : Blank ,S:standard ,T : Test
توضع الكواشف في كل أنبوبة كآلاتي :