1 - تقدير نسبه الهيموجلوبين في الدمأ- طريقة جهاز ساهلي :تعتمد هذه الطريقة علي مقارنة الألوان وفيها يتحول الهيموجلوبين بواسطة حمض الهيدروكلوريك إلى هيماتين حمضي ويتكون هذا الجهاز من ثلاثة أنابيب – اثنتان ملونتان والثالثة( التي توجد بالمنتصف ) تستعمل لأجراء الاختبار وهذه مدرجه لكي تعطي قراؤة الهيموجلوبين بطريقتين :
اما بالنسبة المئوية (%) أو بالجرام ( جم)
1. يؤخذ دم من الإصبع بواسطة ماصة الهيموجلوبين حتى العلامة (0.02 ملل] ).
2. تمسح الماصة من الخارج حتى لا يعلق بها أي دم زائد .
3. توضع هذه الكمية من الدم في أنبوبة جهاز ساهلي موضوع بها حمض هيدروكلوريك مخفف (1/10 ع يد كل) حتى العلامة 20% .
4. ترج الأنبوبـة جيدا وتترك لمدة 10 دقائق حتى يتحول الهيموجلوبين إلى أحد مشتقاته الملونة .
5. لاحظ اللون بعد ذلك :
لو كان الناتج اغمق من لون الأنابيب الأخري ضع بواسطة ماصة باستير حمض يد كل المخفف بالتدريج نقطة نقطة حتى يصبح اللون مماثلا في الأنابيب الثلاثة.
6. اكتب قراءة الهيموجلوبين بواسطة التدريجيين الموجودين علي الأنبوبة ( جم%) وبالنسبة المئوية .
ملحوظة :توجد في بعض الوحدات دفاتر تالكوست لتقدير الهيموجلوبين بالنسبة المئوية وهي غير دقيقة يمكن استخدامها عند اجراء مسح صحي خارج المعمل .
ب - تقدير الهيموجلوبين بطريقة الدرابكن Drabkin Method :
تقدر كمية الهيموجلوبين بقياس اللون الناتج عن اتحاده بالسيانيد بجهاز قياس الطيف الضوئي (Spectrophotometer )
ويجب ان يكون لون محلول التخفيف اصفر باهتا رائقا يعطي درجة امتصاص صفر عند قراءته علي جهاز القياس الطيفي عند طول موجي 540 نانوميتر باستعمال الماء المقطر (Blank)
تنتج الشركات كاشف لتقدير الهيموجلوبين بطريقة السيانيد يتم تخفيفه باتباع إرشادات الشركة المنتجة .
يحفظ محلول التخفيف في زجاجة بنية اللون لعدة شهور في درجة حرارة الغرفة .
كيفية العمل : 1. يوضع 5 مل محلول درا بكين + 20 ميكروليتر (20ul) دم باستخدام ماصة أوتوماتيكية ( أو ماصة الهيموجلوبين ) .
2. ترج الأنبوبة تم تترك لمدة 3 – 5 دقائق حتي يتم التفاعل .
3. يقرا علي طول موجي 540 نانوميتر بعد ضبط صفر الجهاز باستخدام محلول درابكين .
4. تقرأ عينة قياسية (Standard) علي الجهاز
ملحوظة:
هناك بعض الكواشف يمكن قراءة نسبة الهيموجلوبين من جدول مرفق بالكاشف أو بعملية حسابية بسيطة وذلك في حالة عدم وجود المحلول القياسي .
طريقة أعداد منحني قياسي وجدول قياسي :
تعمل تخفيفات متتالية من المحلول القياسي Standard المعروف درجة تركيزه كآلاتي : 2:1 و 3:1 و 4:1 و 5:1وتقرا هذه التخفيفات بعد ضبط صفر الجهاز بمحلول درابكين .
يرسم منحني بياني تقدير الهيموجلوبين بالجرام / لتر في كل قراءة ومنه يمكن عمل جدول قياسي لكافة القراءات وينصح بقياس المحلول القياسي عند تغيير الكاشف أو اجراء صيانة للجهاز.